樣品前處理方法-樣品濃縮(氮吹儀)

1. 引言

色譜分析樣品制備是一個非常重要和復雜的過程，因為色譜分析技術涉及的樣品種類繁多、樣品組成及其濃度復雜多變。樣品物理形態范圍廣泛，對采用分析方法進行直接分析測定構成的干擾因素特別多，所以需要選擇并實施科學有效的處理方法及其技術，達到分析測定或評價和調查的目的。現代色譜儀器對一個樣品的分析測定所需要的時間越來越短，但是色譜分析樣品制備過程所用的時間卻仍然很長。據統計，在大部分的色譜分析實驗中，將一個原始樣品處理成可直接用于色譜儀器分析測定的樣品狀態，所消耗的時間只約占整個分析時間的60%-70%，而色譜儀器測定此分析樣品的時間只約占10%，其余的時間是用于此樣品測定結果的整理和報告等。

1. 樣品前處理過程

2.1預處理

對樣品進行粉碎、混勻和縮分等過程稱為預處理。

固體樣品——含水較低，粉碎過篩。含水量較高取食用部分切碎或先烘干后粉碎過篩。

液體、漿體——攪拌混合均勻

互不相容的液體——先分離再取樣

特殊樣品——根據實驗要求特殊處理

2.2提取

   浸提——針對固體樣品使待測組分轉移到提取液中

   萃取——針對液體樣品，利用某組分在兩種互不相容的溶劑中的分配系數不同，從一種溶劑轉移到另一種溶劑中，從而達到提取目的。

2.3凈化

   去除雜質的過程稱為凈化。

   萃取法——適用于液體樣品，少量多次

   化學法——通過使雜質或待測物發生化學反應而改變其溶解性，使其與原體系分離。

   層析法——利用混合物中各組分的理化性質（如溶解度、吸附能力、電荷、分子量、分子極性和親和力等）不同，使各組分在支持物上的移動速度不同，而集中分布在不同區域，借此將各組分分離。

2.4濃縮

   樣品經過提取凈化后，體積變大，待測物濃度降低，不利于檢測，所以濃縮的目的是減小樣品體積提高待測物濃度，常見方法如下：

常壓濃縮——適用于揮發性和沸點相對較低的組分，通過升高溫度，將溶劑由液態轉化成氣態被抽走或被通過冷凝器再次收集，從而達到濃縮目的。

減壓濃縮——通過抽真空，使容器內產生負壓，在不改變物質化學性質的前提下降低物質的沸點，使一些高溫下化學性質不穩定或沸點高的溶劑在低溫下由液態轉化成氣態被抽走或被通過冷凝器再次收集。

冷凍干燥——冷凍的同時減壓抽真空，使溶劑升華，適用于生物活性樣品。

氮吹濃縮——適用于體積小、易揮發的提取液。采用惰性氣體對加熱樣液進行吹掃，使待處理樣品迅速濃縮，達到快速分離純化的效果。該方法操作簡便，尤其可以同時處理多個樣品，大大縮短了檢測時間。被廣泛應用于農殘檢測，制藥行業和通用研究中的樣品批量處理。

2.5 氮氣漩渦吹掃技術

該裝置采用氮氣旋渦旋轉吹掃技術, 樣品在一定溫度下, 通過氮氣吹掃, 使待測物質獲得良好富集效果。濃縮儀由微處理器控制, 保證樣品的自動濃縮蒸發。氣體噴嘴吹出氮氣流在濃縮管內形成螺旋狀氣流, 減緩了氣流沖力, 使溶劑均勻揮發且不飛濺。

2.6氮吹濃縮影響因素

適當增加溫度能提高目標物質回收率。對于不同物質, 可以通過設置濃縮儀的參數適當控制濃縮時溫度和壓力, 縮短濃縮時間, 以達到更好的回收率。

2.6.1氮氣流壓力對回收率的影響

旋渦氮吹濃縮儀氮氣流量改變是通過調節氮氣進口壓力實現, 管徑不變, 流量與壓力成正比關系。氮氣流的壓力越大, 氮氣流流量就越大。氮氣流撞到試管壁形成旋渦, 溶劑接觸表面積和旋渦剪力越大, 溶劑的蒸發越快, 同時不停吹掃氮氣能避免溶劑與空氣發生化學反應。

2.6.2水浴溫度對氮氣流的影響

濃縮管浸在水浴中, 通過傳熱控制濃縮管內溶液溫度。通常水浴溫度控制范圍從30℃到60℃。溫度設定根據濃縮管里溶劑的沸點和被分析物質性質而定。水浴溫度一般要低于溶劑沸點溫度, 否則可能蒸發速度過快, 回收率可能降低。但是溫度設置過低, 會導致濃縮時間過長, 長時間氮氣吹掃也會導致待測物質揮發。在設置水浴溫度時應充分考慮溶劑的沸點和揮發性。溫度高, 能縮短濃縮時間, 避免目標物質與空氣長時間接觸, 減少目標物質揮發, 但過高溫度會導致溶劑沸騰, 從而降低回收率。

2.7氮吹儀

   氮吹儀主要用于氮吹濃縮步驟，基本原理是與氮氣瓶鏈接，通過減壓閥

將氮氣通入到氮吹儀的通氣板中，然后通過通氣板上的氮吹針對樣品進行

吹掃達到濃縮目的，并在試管底部進行加熱用來加速溶劑的揮發。

蔬菜中26種農藥殘留前處理及檢測方法

      文中建立蔬菜中26種有機磷、有機氯和菊酯等三大類農藥殘留的固相萃取 -毛細管氣相色譜的快速檢測方法。

1試樣的制備

1.1 提取 　

      樣品用組織搗碎機制成勻漿狀 ,準確稱取20g試樣 ,加入 50 mL乙腈 ,在勻漿機中高速勻漿1 min后濾紙過濾 ,濾液收集到裝有5～10 g氯化鈉的100 mL具塞量筒中,收集濾液,蓋上塞子,劇烈震蕩1 min,在室溫下靜置30 min,使乙腈相和水相清晰分層。

1.2　樣品凈化

1.2.1有機磷類農藥凈化

      從 100 mL具塞量筒中吸取5.0 mL乙腈溶液 ,放入 10 mL刻度試管中 ,于氮吹儀上濃縮至近干(水浴50℃)。移取2.0 mL丙酮于刻度離心管中 ,在旋渦混合器上混勻后 ,供氣相色譜分析。

1.1.2  有機氯和菊酯類農藥凈化

      從 100 mL具塞量筒中吸取 10.0 mL乙腈溶液 ,放入 10 mL刻度試管中 ,于氮吹儀上濃縮至近干 (水浴 50℃)，移取 2.0 mL正己烷溶解殘渣 ,在旋渦混合器上混勻待凈化。

      將 Florisil柱依次用 5.0 mL丙酮 /正己烷 (10: 90, v/v)5.0 mL正己烷預洗條件化 , 當溶劑液面到達柱吸附層表面時立即加入樣品溶液 , 用 10 mL刻度離心管收集洗脫液 , 用5 mL丙酮:正己烷 (10: 90, v/v) 洗滌刻度離心管后過 Floris柱 , 并重復一次。將離心管置于氮吹儀上 ,水浴溫度 50℃, 氮吹蒸發至小于 4.0 mL, 用正己烷準確定容至 4.0 mL。在旋渦混合器上混勻后 , 供氣相色譜分析。

動物源食品中激素多殘留前處理方法（GB/T 21981-2008）

1引言

根據相關報道，一些奶廠可能會經受不住利益的誘惑在奶牛生病的情況或不孕的情況下，盲目的為了提高奶牛產奶量，會使用抗生素和激素等禁止的藥品。嬰幼兒食用含有激素的奶粉后可能產生性早熟現象，對嬰幼兒身體產生嚴重傷害。

部委托北京市疾病預防控制中心、中國檢驗檢疫科學院等檢測機構，采用通行的檢測方法(《動物源食品中激素多殘留檢測方法 液相色譜-質譜-質譜法》GB/T21981-2008)對多種奶粉進行檢測，結果激素含量并未超標，但人們卻對嬰幼兒的健康保障陷入深思，有很多家長已經成了驚弓之鳥不知道該買什么樣的奶粉才能讓自己的孩子健康成長，所以建立相關激素的簡易檢測方法是一件既有經濟效益又會給人類造福的事情。

2 試樣的制備

2.1 動物肌肉、肝臟、蝦

    從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500 g，剔除筋膜，蝦去除頭和殼。用組織搗碎機充分搗碎均勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標明標記，于-18℃以下冷凍存放。

2.2 牛奶

    從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500g，充分搖勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標明標記，于0℃—4℃以下冷藏存放。

2.3 雞蛋

    從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500 g，去殼后用組織搗碎機充分攪拌均勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標明標記，于0℃—4℃以下冷藏存放。注：制樣操作過程中應防止樣品被污染或其中的殘留物發生變化。

3 樣品提取凈化

3.1 提取

稱取5g試樣(至0.01g)于50mL具塞塑料離心管中，準確加入內標溶液(4.15)100μL和10mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，漩渦混勻，再加入β-葡萄糖醛酸酶溶液100μL于37±1℃振蕩酶解12h。取出冷卻至室溫，加入25mL甲醇超聲提取30min，0℃～4℃下10000r／min離心10min，將上清液轉入潔凈燒杯，加水100mL，混勻后待凈化。

3.2 凈化

提取液以2mL/min～3mL/min的速度上樣于活化過的ENVI-Carb國相萃取柱。將小柱減壓抽干，在將活化好的氨基柱串接在ENVI-Carb固相萃取柱的下方。用6mL二氯甲烷-甲醇溶液洗脫并收集洗脫液，取下小柱，再用2mL二氯甲烷-甲醇溶液洗氨基柱，洗脫液在微弱的氮氣流下吹干，用1mL甲醇-水溶液溶解殘渣，采用LC-MS/MS法進行測定。

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